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      病毒RNA提取試劑盒操作步驟說明書
      點擊次數:76 發布時間:2022-06-13

        

      病毒RNA提取試劑盒說明書

       

      RNApure Virus Kit

       

      目錄號:K0586

       

      運輸條件:室溫(15-25℃)。

       

      保存條件:室溫(15-25℃)。

       

      組分說明

       

                          Size                            50

                          Buffer RLV                     15 ml

                          Buffer RW1                     40 ml

                          Buffer RW2concentrate)        11 ml

                          Proteinase K                  12.5 mg

                          Proteinase K Storage Buffer   1.25 ml

                          RNase-Free Water               10 ml

                          Spin Column RS                  50

                          Collection Tube1.5 ml)         50

                          Collection Tube2 ml)           50

       

                    本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

       

      產品簡介

       

        本試劑盒采用可以特異性結合病毒 RNA的吸附柱和獨特的緩沖液系統,適用于從血清、血漿、尿液、腦脊液等無細胞體液及細胞培養上清液中分離病毒RNA。病毒RNA特異性地結合到硅基質膜上,而污染物則流過該膜。通過兩次高效洗滌完全去除蛋白質等雜質,然后用無RNase的水或試劑盒提供的RNase-Free  Water洗脫高純度的病毒RNA。由本試劑盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time  RT-PCR和印跡分析等實驗。

       

      自備試劑:無水乙醇,0.9% NaCl。

       

      實驗前準備及重要注意事項

       

      1.向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解,-20℃保存。配制好的Proteinase  K勿長時間室溫放置,避免反復凍融,以免影響其活性。

      2.預防RNase污染,應注意以下幾方面:

         1)使用無RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

         2)玻璃器皿應在使用前于180℃高溫下干烤4小時,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸10分鐘,用水徹底沖洗后高壓滅菌。

         3)配制溶液應使用無RNase的水。

         4)操作人員戴一次性口罩和手套,實驗過程中要勤換手套。

      3.血清或血漿避免反復凍融導致蛋白變性或產生沉淀,減少病毒滴度進而影響提取病毒核酸的產量。

      4.第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在Buffer RW2中加入無水乙醇。

      5Buffer RLV如果產生沉淀,可在56℃加熱使其溶解后室溫放置。

      6.所有離心步驟若無特殊說明均在室溫下進行,且所有操作步驟動作要迅速。

       

      操作步驟

       

      1.室溫下取200 μl血清或血漿加到1.5 ml離心管(自備)中。

         注意:不足200 μl可以加入0.9 % NaCl(客戶自備)補足。

      2.向上步溶液中加入20 μl Proteinase K,混勻。

      3.加入200 μl Buffer RLV,渦旋震蕩15秒。

       

         注意:不要直接把Proteinase K加到Buffer RLV中。

      456℃孵育15分鐘,短暫離心,將管壁上的溶液收集到管底。

      5.加入250 μl無水乙醇,渦旋震蕩15秒,室溫孵育5分鐘,短暫離心,將管壁上的溶液收集到管底。

      6.將步驟5得溶液全部加入到已裝入收集管(Collection  Tube 2  ml)的吸附柱(Spin Column RS)中,若一次不能將全部溶液加入吸附柱中,請分兩次轉入,8,000 rpm~6000 ×g)離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

      7.向吸附柱中加入500 μl Buffer RW1,8,000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

      8.向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無水乙醇),8,000  rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

      9.向吸附柱中加入500 μl無水乙醇,8,000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

      10.12,000 rpm (~13,400×g)離心3分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘,以徹底晾干。

       

         注意:1)這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。

       

         2)推薦步驟:將吸附柱放入一個新的1.5 ml離心管(自備)中,打開管蓋,56℃烘箱孵育3分鐘,使吸附柱的膜徹底干燥。

      11.將吸附柱置于一個新的無RNase離心管(Collection Tube 1.5  ml)中,向吸附柱的中間部位懸空加入20-50 μl RNase-Free Water,室溫放置5分鐘,12,000 rpm離心1分鐘,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

       

         注意:1RNase-Free Water體積不應小于20 μl,體積過小影響回收率。

         2)如果要提高RNA的產量,可用20-50 μl新的RNase-Free Water重復步驟11。

       

         3)如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復步驟11。

       

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